超過50%的蛋白在大腸桿菌中表達形成成不溶性的包涵體。形成包涵體的蛋白通常是那些高度表達的蛋白。重新使包涵體具有生物活性結構是低成本獲得足量樣品的有效途徑。萬生昊天提供恢復靶蛋白質天然構象的復性服務。復性技術包括動態光散射(DLS)和其他引導復性進程的方法。
標準protocol
雖然有一些蛋白復性的基本的條件,但是每個蛋白的具體條件無法預測。各個蛋白的溶劑條件都不一樣,包括鹽,pH值,去污劑和各種添加劑。包括復性途徑和復性速率的動力學過程也是至關重要的。不可能去也沒必要去嘗試所有條件的組合。多年來,經過大量的測試,我們發現了幾個在復性中的關鍵因素。在此基礎上,我們建立了一個標準的復性protocol。
對于復性項目,我們會首先嘗試標準protocol的三種條件。迄今為止,我們已經成功復性了約65%的蛋白質。我們通過蛋白的溶解度判斷復性效果。
定制protocol
經標準protocol處理仍無法復性的情況下,可進行定制服務,篩選18個復性條件。復性成功的樣品會先寄小樣給客戶進行活性檢測,并根據客戶反饋擴大復性規模。也可以由我方進行活性檢測。
復性分析
一般通過溶解性檢測復性效果。如果一個蛋白能在溶液中保持穩定,復性就是成功的。但是很多復性后的蛋白仍然是無生物活性的。這有可能是因為蛋白形成了可溶性的寡聚體或者蛋白仍然處于展開/錯誤折疊構象。
如果必要,萬生昊天將應用DLS(動態光散射)、分子排阻色譜法和圓二色譜分析復性蛋白。分析結果有助于恢復靶蛋白天然構象和生物功能。
報價
1,對于蛋白質復性項目,請給我們發電子郵件詢價
2,對于已和我們簽約的蛋白表達和純化項目,如果蛋白在小試時不溶,我們會發給您一個復性的單獨報價以及項目進展報告。
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